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GB/T 42239.2-2022 洗滌用酶制劑 第2部分: 脂肪酶

范圍
本文件規(guī)定了洗滌用脂肪酶的產(chǎn)品分類、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則，以及標志、包裝、運輸、貯存和保質期。
本文件適用于經(jīng)微生物發(fā)酵、提純等工藝制得的用于洗滌劑工業(yè)的脂肪酶。

術語和定義
下列術語和定義適用于本文件。
脂肪酶  lipase
可將甘油三酯(油脂)水解，在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油，同時也能催化酯合成和酯交換反應的酶。
脂肪酶酶活力  lipase activity
脂肪酶催化脂肪水解的能力。
注: 脂肪酶酶活力以脂肪酶酶活力單位表示，1g固體酶粉(或1mL液體酶)，在一定溫度和pH條件下，1min內水解底物產(chǎn)生1μmol的可滴定脂肪酸，即為1個酶活力單位，用U/g表示。

符號和縮略語
下列符號和縮略語適用于本文件。
JB-04: 胡蘿卜素豬油污布。
F₁: 洗前白度值。
F₂: 洗后白度值。
R: 去污值。
P: 去污比值。

產(chǎn)品分類
按產(chǎn)品形態(tài)分為液體劑型和固體劑型。

要求
外觀和理化性能要求
產(chǎn)品的外觀和理化性能指標應符合表1的規(guī)定。


定量包裝要求
每批產(chǎn)品的銷售包裝凈含量應符合 JJF 1070 的要求。

試驗方法
酶活力
按附錄A進行。
采用不同于附錄A的方法測定時，應提供所應用的酶活力單位與本文件確定的酶活力單位的轉換系數(shù)。

附錄A  (規(guī)范性)
酶活力的測定
A.1 方法概要
脂肪酶在一定條件下，能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯和甘油，所釋放的脂肪酸可用標準堿溶液進行中和滴定，用酚酞指示劑或自動滴定儀指示反應終點，根據(jù)消耗的堿量，計算其酶活力。反應式為:
RCOOH+NaOH→RCOONa+H₂O
注1: 洗滌劑的存在會嚴重影響本方法。依不同洗滌劑的類型和濃度不同，這種影響表現(xiàn)為從完全抑制到激活。
注2: 酶會附著在塑料上，因此實驗中用玻璃器具，避免使用塑料材質器具(移液槍頭除外)。

A.2 試劑
A.2.1 聚乙烯醇(PVA)，聚合度1750±50[不同來源或批號的PVA對實驗結果有影響，結果報告應標明聚乙烯醇(PVA)廠家及生產(chǎn)批號]。
A.2.2 橄欖油(不同來源或批號的橄欖油對實驗結果有影響，結果報告應標明橄欖油廠家及生產(chǎn)批號)。
A.2.3 95%乙醇。
A.2.4 磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)。
A.2.5 十二水磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)。
A.2.6 氫氧化鈉。
A.2.7 鹽酸。
A.2.8 酚酞。

A.3 儀器
A.3.1 恒溫水浴: 精度為±0.2°C。
A.3.2 高速勻漿機。
A.3.3 pH計: 精度為0.01pH單位。
A.3.4 自動電位滴定儀。

【實驗儀器制備，推薦使用】酶活力的測定

京都電子KEM 電位滴定法自動電位滴定儀 AT-710S

自動電位滴定儀操作視頻：

A.3.5 自動移液器。
A.3.6 電磁加熱攪拌器。
A.3.7 電磁攪拌器。
A.3.8 微量滴定管: 10mL，分刻度≤0.05mL。
A.3.9 分析天平: 精度為0.0001g。

A.4 溶液
A.4.1 2%PVA溶液
稱取聚乙烯醇(PVA)10g(精確至0.1g)到500mL燒杯中，加水400mL，放入合適的轉子，在電磁加熱攪拌器上邊加熱邊攪拌，攪拌速度以能把所有的PVA攪拌起來為宜，在微沸狀態(tài)下加熱攪拌約1h，

直至全部溶解，在攪拌狀態(tài)下逐漸冷卻至室溫，定容到500mL，該溶液室溫下有效期為2d，密封保存。
注: 不能使用如冰塊等快速冷卻方式。
A.4.2 橄欖油底物溶液
稱取2%PVA溶液150g，加橄欖油50g，用高速勻漿機在7000r/min(當乳化效果不好時可加大轉速)下處理3min，即成乳白色PVA乳化液，放入轉子，在電磁攪拌器上攪拌約20min，密封保存，該溶液室溫下有效期為2d。若底物溶液在保存期內出現(xiàn)底部分層現(xiàn)象，應重新配制，若重新配制依然有底部分層現(xiàn)象或者在水浴中反應時有明顯沉淀產(chǎn)生，更換其他來源的聚乙烯醇(PVA)。
注: 每次使用前需要攪拌并在攪拌的狀態(tài)下移取該溶液，每次使用完畢及時密封保存。
A.4.3 鹽酸溶液(1mol/L)
A.4.4 氫氧化鈉溶液(0.5mol/L)
A.4.5 磷酸緩沖液(pH為7.5)
稱取磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)19.6g，十二水磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)396.2g，加水約4.5L，攪拌至溶解均勻，用0.5mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調整pH至7.50±0.05，定容到5L。
A.4.6 氫氧化鈉標準溶液(0.05mol/L)
按 QB/T 2739 配制與標定0.5mol/L的氫氧化鈉標準溶液。使用時，準確稀釋10倍。
A.4.7 酚酞指示液(10g/L)

A.5 樣品溶液的制備
稱取約1g樣品(稱準至0.001g)，用磷酸緩沖液溶解并稀釋。樣品稱量定容后放入轉子，在電磁攪拌器上攪拌15min。
稀釋時控制酶液濃度，推薦稀釋倍數(shù)參考表A.1，例如，當樣品酶活力約為100000U/g時，稱量約1g樣品到100mL容量瓶中，再稀釋200倍。樣品與空白消耗堿量之差在1.4mL~1.6mL范圍內，若最終滴定結果超出該范圍，重新稀釋直至該范圍內。


A.6 試驗步驟
A.6.1 程序
按照表A.2所列程序分別進行空白和樣品試驗，選擇自動電位滴定法或酚酞指示劑滴定法進行滴定。


A.6.2 滴定
A.6.2.1 自動電位滴定法
對自動電位滴定儀進行儀器校正，用0.05mol/L的NaOH標準溶液即刻滴定，以突躍為滴定終點，最終溶液pH在30s內保持不變，記錄消耗0.05mol/L的NaOH標準溶液的體積。
A.6.2.2 酚酞指示劑滴定法
加酚酞指示劑兩滴，用0.05mol/L的NaOH標準溶液即刻滴定，滴定至微紅色并保持在30s內不退色為滴定終點，記錄消耗0.05mol/L的NaOH標準溶液的體積。

A.7 結果計算
產(chǎn)品的酶活力X以U/g表示，按公式(A.1)計算:

式中:
X ——產(chǎn)品的酶活力，單位為酶活力單位(U/g)；
V₁ ——滴定樣品時消耗0.05mol/L氫氧化鈉標準溶液的體積，單位為毫升(mL)；
V₂ ——滴定空白時消耗0.05mol/L氫氧化鈉標準溶液的體積，單位為毫升(mL)；
c ——氫氧化鈉標準溶液濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
0.05——氫氧化鈉標準溶液濃度換算系數(shù)；
n ——試樣的稀釋倍數(shù)；
50——0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.00mL相當于脂肪酸50μmol
m ——試樣的質量，單位為克(g)；
1/15——反應時間15min，以1min計。
結果按修約值表示，當結果大于或等于10⁵，后三位取整；當結果大于或等于10⁴且小于10⁵，后兩位取整；當結果大于或等于10³且小于10⁴，后一位取整。

A.8 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術平均值的10%，以大于10%的情況不超過5%為前提。